3 Bersaudara Ha Ha terdiri dari: Kuroki Koji, Juumonji Kazuki, dan Toganou Shouzou. Kenapa mereka disebut 3 Bersaudara Ha Ha? Sebab kalau ada apa-apa mereka pasti bilang: Toganou: HA?; Juumonji: HAA?; Kuroki: HAAAH?!. Mereka djuluki demikian oleh Hiruma meski mereka tidak ada hubungan saudara. Mereka sudah berteman sejak SMP. Dari dulu mereka adalah berandalan namun pada akhirnya mereka merasa diakui setelah bermain American Football di Devil Bats dan mulai bertambah serius. Posisi mereka bertiga adalah lineman. Awalnya mereka selalu menjahili Sena, tetapi setelah diancam Hiruma dan mengetahui Sena adalah Eyeshield 21, mereka menjadi baik pada Sena. Juumonji adalah yang paling normal diantara mereka bertiga, dan dijuluki "kakak" oleh dua sahabatnya itu. Toganou sangat suka membaca manga serta membawanya kemana-mana, sedangkan Kuroki sangat pandai main video games.
Baru muncul di volume 10, kakak Suzuna yang sangat bodoh tetapi sangat pintar dalam segala hal yang berhubungan dengan american football ini sangat gemar mengucapkan "AHA-HA~" dan menjuluki dirinya sebagai jenius. Sena bertemu dengannya saat ujian masuk pemain San Antonio Armadillos di Amerika. Natsuhiko tidak lulus, malah Sena yang lulus, tapi ia pergi sebelum namanya diumumkan. Natsuhiko orangnya tidak mau kalah, dan sangat dibenci oleh tiga bersaudara Ha Ha dan Monta karena sering sok akrab pada Mamori pula. Natsuhiko sering tersesat karena terlalu pede kalau naik bis, ia pasti tersasar entah ke Nagano atau daerah lain yang jauh. Tetapi tubuhnya sangat lentur.
Raimon, yang biasa dipanggil Monta adalah pemain No. 80 di Deimon Devil Bats dengan posisi receiver.Awalnya Monta adalah anggota klub baseball tapi karena keahliannya cuma catching, dia cuma mendapat posisi di tim tiga. Setelah dibujuk Sena, dan tipuan dari Hiruma karena ia tahu Monta menyukai Mamori sehingga ia bilang bahwa Eyeshield 21 adalah orang jahat yang cuma mamanfaatkan Mamori, jadi ia bilang pada Monta agar masuk klub untuk menyelamatkan Mamori. Monta sangat kesal dipanggil Monta tapi setelah diberitahu Hiruma bahwa nama itu diambil dari nama Joe Montana Monta akhirnya tidak keberatan. Monta sangat menyukai Mamori, dan selalu berusaha menarik perhatiannya walaupun selalu berakhir tragis.
Kurita adalah teman dari Hiruma. Dia adalah pemain terbesar dan terberat di Deimon Devil Bats. Ayah Kurita adalah seorang pengawas aliran Budha Morenshu. Karena menurutnya biksu masa depan harus dibesarkan menjadi kuat, ia jadi memberi Kurita makanan yang berlebihan. Kurita memang teman dari Hiruma, tetapi dia orang yang sangat baik. Saking baiknya, di versi anime dia tidak pernah menggunakan kekuatan aslinya sampai Onihei kesal padanya dan mengajarkan bahwa sebagai seorang Line dia tidak boleh merasa kasihan pada lawannya. Kurita orangnya agak pesimistis dan penakut bila akan bertanding namun bila sudah di lapangan dia akan berubah sebagai lineman yang hebat. Kurita merupakan lineman terbaik di Turnamen Musim Gugur, sedangkan Sena sebagai running back terbaik.

Musashi yang mukanya seperti orang tuanya ini adalah kicker hebat yang dijuluk 60 Yard-Magnum meski cuma akal-akalan Hiruma. Musashi terpaksa keluar dari tim karena harus menjalankan usaha kontraktor keluarganya karena ayah Musashi sakit parah. Saat itu juga Musashi juga keluar dari tim dan SMA Deimon. Namun pada pertandingan melwan Seibu Wild Gunmans, akhirnya ia kembali masuk Deimon Devil Bats. Sebenarnya Musashi masih ingin bermain American Football dengan Hiruma dan Kurita, namun ia terpaksa berhenti. Ia kembali setelah dipukul ayahnya agar Musashi jujur pada diri sendiri. Musashi dipanggil demikan karena kanji Takekura bisa dibaca Musashi.

Cowok kuat pendek dengan hidung merah ini merupakan murid Kurita. Ayahnya seorang pekerja pemindahan rumah. Walaupun kuat, Komusubi sering merasa minder dengan tubuhnya, apalagi ketika ia akan mengahdapi Mizumachi dari Kyoshin Poseidon. Namun ia berhasil membuktikan kalau tinggi badan bukan masalah. Kata-katanya sering tidak dimengerti karena ia selalu menggunakan bahasa powerful.

Soundtrack

Lagu pembuka

1. BREAKTHROUGH oleh Coming Century
2. Innocence oleh 20th Century
3. Dang Dang oleh ZZ
4. Blaze Line oleh BACK ON
5. Hanno no Runningback oleh SHORT LEG SUMMER

Lagu penutup

1. Be Free oleh Rikkenzu
2. Blaze Away oleh The TRAX
3. GOAL oleh Arashiro Beni
4. RUN TO WIN! oleh Sena, Monta, Kurita dan Mamori
5. a day dreaming... oleh BACK ON
6. Flower oleh BACK-ON
7. Song Of Power oleh SHORT LEG SUMMER

• Insert Song

1. Be Survivor oleh ZZ
2. Chain of Power oleh Deimon Devil Bats
3. MIDNIGHT SUNSHINE oleh Ojou White Knights
4. Chain Of Power oleh V6

Tim-tim Lain

1. Ojou White Knights dikenal sebagai tim dengan pertahanan terkuat. dengan Shin Seijirou sebagai salah satu kunci pertahanan.

2. Seibu Wild Gunmans merupakan tim dengan gaya menyerang shotgun, yaitu formasi yang menggunakan banyak receiver sekaligus. Sangat efektif karena lemparan supercepat dari Kid sang quarter back.

3. Shinryuji Naga merupakan tim terkuat wilayah kanto(sebelum dikalahkan deimon devil bats)yang langganan ikut christmas bowl. dengan Agon dan Ikkyu sebagai pemain andalan dan formasi dragon fly yang sulit ditebak.

4. Hakushuu Dinosaurs tim yang lolos ke turnamen kanto dengan cara menghancurkan semua quarter back lawan. dengan Gaou Rikiya sebagai line yang sangat kuat.

5. Taiyo Sphinx merupakan tim terberat di Jepang, dengan barisan line yang kuat dan Banba sebagai pusatnya.

6. Teikoku Alexanders tim terkuat di Jepang, langganan juara christmas bowl. dengan Yamato Takeru(the real eyeshield 21) dan Taka(anak dari Honjou Taka sang receiver baseball legendaris)sebagai bintangnya.

7. Zokugaku Chameleons

8. Kyoshin Poseidon

9. Bando Spider

10. NASA Aliens